人參皂甙對老齡大鼠海馬結構膽堿能纖維的影響

海馬各區含有大量的乙酞膽堿酷酶(AChE)陽性終末，主要來源于基底前腦的膽堿能神經元。AD患者的中樞神經系統有廣泛的神經病理學改變，其中以基底前腦膽堿能神經元損害占主要地位[m。學習記憶、認知行為的改善程度與海馬膽堿能纖維網的密度密切相關Czl。近來研究表明人參皂貳( GS)處1可明顯改善淀粉樣膚所致小鼠被動回避，能夠改變AChE活性[al，并且認為其對膽堿能系統的影響可能是人參皂貳Rgl的重要作用機制之一。本研究擬探討人參皂貳對老齡大鼠海馬結構膽堿能纖維改變的影響，為人參皂貳抗腦衰老及改善老年動物膽堿能系統認知能力提供可靠的酶細胞化學基礎。

1材料和方法

1. 1實臉動物及分組選用相同環境下飼養的SPF級(中國醫科大學動物部SCXK[遼〕2003-0009) Wistar雌性大鼠24只，隨機分為3組(n=8)，青年組(3-r5月齡)、老齡組(27月齡)，老齡給藥組(從第17個月始飼以人參皂貳至27個月齡)。給藥方法:按照25 mg·掩一’·d-’的劑量[47將人參皂貳溶人水中，動物隨日常飲水而自行服用(人參皂貳購自吉林省集安萬泰中藥廠，純度為81寫，主要成分為;Re: 21. 2 0 o .Rgl:10.000、Rbl:2.700、Rg2 : 3. 7 0 o、Rg3 : 2. 4 0 o、Rd:10.9%)。

1. 2 AChE酶細胞化學標本制備動物在10%水合抓醛(( 3. 5 ml/噸)腹腔麻醉下，經左心室主動脈插管灌注0. 9 % NaCI 150 ml, 4%多聚甲醛350 ml固定后取腦，4h后人30 0 o Holt溶液內，翌日待腦組織塊下沉后，OC'I'包埋，-22℃恒冷箱切片機將腦組織切成額狀20 }m厚連續切片。

1. 3 AChE酶細胞化學染色程序按照陳嘯梅[s7并經我們改進后的方法進行AChE酶細胞化學染色。切片浸人雙蒸水后，置人作用液(堿化乙酞硫膽堿5 mg.0. 06 mol/L醋酸鈉6. 32 m1,0. 1 mol/L醋酸0. 2 m1,0. 1 mol/L檸檬酸鈉0. 48 ml, 30 rnmol/L硫酸銅1 m1,4 rnmol/L異-OMPA 0. 2 ml, 5 ml鐵氛化鉀1 ml,蒸餾水0. 8 ml, pHS. 5-r 5. 6) 37℃恒溫箱中孵育2h。然后脫水、透明、中性樹膠封片。鏡下觀察可見棕黃色的AChE陽性纖維及終扣。

1. 4顯微圖像分析及統計學處理用MetaMorph/DP10/BX 41圖像分析系統對AChE染色切片進行分析和處理。各組每例隨機取4張切片，高倍鏡下測定各組的CAl } CA3區、齒狀回膽堿能纖維的密度(IOD=積分光密度值)。采用EXCEL 2000統計軟件對所有數據進行統計學分析和處理，組間比較進行t檢驗和AVONA分析。

2結果

海馬結構的CA3區、CAl區、齒狀回、下托和海馬傘內均含有豐富的AChE陽性纖維。本實驗重點觀察與學習記憶及老化密切相關的CA3 , CAl區和齒狀回。鏡下可見青年組海馬CA3 , CAl區錐體細胞層棕黃色的膽堿能纖維非常密集，粗細均勻且交織成網。海馬腔隙分子層內縱行纖維較長并形成串珠狀，末端可見終扣(圖1A, 2A)。齒狀回的纖維在顆粒細胞層靠近分子層和多型細胞層處較為密集，著色亦很深(圖 3A)。老齡組CA3區膽堿能纖維缺失明顯，特別是錐體細胞層最為嚴重，纖維萎縮變細、斷裂，串珠狀纖維及終扣減少，但輻射層縱行纖維不明顯且纖維橫向分支少，稀疏纖維隨處可見。并且纖維顏色亦變淡(圖1B)。老年組CA1區錐體細胞層纖維變細，排列紊亂，顏色變淡且纖維網密度也降低，輻射層縱行纖維不明顯且纖維橫向分支少，末端終扣較少。有些纖維雖有串珠狀特征，但很短(圖2B)o

32人拳皂貳對老路大筑海馬結構膽械能扦雄的影響

人參皂貳明顯改善饑體的某些衰老癥狀，其適應原樣作用，突進蛋白質代謝和改變霉活性的作用倍受關注人參皂貳通過促進乙院膽堿釋放.增加坤經未梢攝取Rb1,rb2對神經元具有保護及營養作用，并可促進神經元突起再生，增強神經元抗損傷與凋亡的能力Cal。本研究給藥組海馬結構膽堿能纖維的各種改變有所減輕，CA3,CA1及齒狀回3個亞區膽堿能纖維的密度均值比老齡組分別增加了31.2%,76.500和116. 8 0 o。本實驗證實了人參皂貳不僅使損傷的海馬結構膽堿能神經纖維開始側枝出芽或者再生的軸突開始延伸，而且可使二者重新獲得膽堿能纖維的支配。新近研究報道Csl丹參酮連續灌胃14d，觀察到AI〕大鼠海馬各亞區膽堿能纖維面積百分比顯著低于對照組。我們在老齡前期給予人參皂貳低劑量10個月，在整個神經系統機能恢復過程中逐漸、持續的發揮其調節作用。婁愛林[}o」證明人參皂貳可促進海馬CAl , CA3區苔鮮纖維末端的發芽，并可使齒狀回顆粒細胞長時程增強的持續時間延長，從而提高大鼠的學習記憶能力，但尚缺少量化指標。本實驗證明了學習記憶行為的改善程度可能與海馬膽堿能纖維網的密度密切相關。人參皂貳提高老齡大鼠膽堿能纖維密度的能力，可能也與膽堿能系統相關介質酶活性等的恢復密切相關。